Identification of human scFVs targeting atherosclerotic lesions: Selection by single round in vivo phage-display

    Robert R, Jacobin-Valat MJ, Daret D, Miraux S, Nurden AT, Franconi JM,Clofent-Sanchez G.

    我们的目的是研究在体内动脉粥样硬化早期损伤生物板（biopanning）的发展和鉴定疾病区域的抗体。我们设计了一个两步方法可以快速分离人类单克隆噬菌体展示单链抗体（MoPhabs），在患有动脉粥样硬化的动物模型中的斑块进展部位发现了该抗体与蛋白质发生反应。在体内生物板单循环后，通过组织学和NMR显微镜检查法可鉴定兔主动脉的疾病切片中MoPhabs可被洗脱。MoPhabs原位表达通过负的菌落滤网选择，这种滤网有能力识别动脉粥样硬化，而不能识别正常动脉。用我们的方法选择的MoPhabs 可以大部分结合到动脉粥样硬化病变处。B3.3G和 B3.GER产生scFv片段，可以作为一种抗原表位存在在动脉粥样硬化病变的表面和复杂斑块内膜层。给 ApoE-/-小鼠体内注射了人的MoPhabs并寄居在动脉粥样病变内。用B3.3G识别~56 kDa高亲和力纯化的蛋白质并且通过大量光谱测定法作为一种玻璃粘连蛋白被鉴定。这是首次在体内使用生物板选择人的抗体作为诊断影象学的侯选和在动脉粥样斑块得到靶序列。（J Biol Chem. 2006 Oct 26.）