摘要
目的 研究中国动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)患者和正常人载脂蛋白B(apoB)基因XbaⅠ和EcoRⅠ两位点多态性与血脂水平的关系。方法 采用聚合酶链式反应技术检测了85例ACI患者及56例正常人(NC)的apoB基因多态性。结果 (1)NC组X-X+基因型血浆TC水平明显高于X-X-基因型(P＜0.001)；ACI组与NC组少见E+E-或E-E-基因型，血浆TG水平明显高于E+E+基因型(P＜0.02)。(2)X-X-基因型个体：ACI组血浆TC、TG、apoB、Lp(a)水平明显高于NC组，apoA水平明显低于NC组。(3)ACI组EcoRⅠ位点不同基因型个体TC、TG水平均明显高于NC组，而apoA水平明显低于NC组。结论 呈X-X-基因型患者可能与ACI患者血脂异常有关，apoB基因多态性对血浆TC、TG水平影响较大。
动脉粥样硬化(AS)是导致脑梗死的主要因素，目前有关apoB基因多态性与AS、冠心病(CHO)、心肌梗死(MI)等关系报道较多，但其与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)之间及血脂代谢的变化之间关系研究尚少。本研究采用多聚酶链反应(PCR)技术检测了我国(南京地区)正常人和ACI患者apoB基因XbaⅠ、EcoRⅠ酶切位点多态性，旨在探讨apoB基因变异与ACI发病及脂质异常的关系。
1 对象和方法
1.1 对象 (1) ACI患者85例(男47例，女38例)，年龄47～84岁，平均(64.5±9.2)岁。依据全国第二届脑血管疾病诊断标准［1］，经临床检查及头颅CT和/或MRI扫描确诊。 (2) 对照组(NC)56例(男34例，女22例)，年龄45～82岁，平均(61.3±12)岁。均为年龄相匹配之正常健康汉族人，既往无高血压、冠心病、脑血管及糖尿病等病史。
1.2 方法
1.2.1 基因组DNA、PCR扩增： 取EDTA-K3抗凝血0.5 mL，采用文献［2］报道的NaI法提取白细胞基因组DNA，参考文献［3］的报道设计合成引物(中国科学院上海细胞生物所合成)。 PCR反应条件为93.5℃变性1 min，68℃退火和延伸3 min，共35个循环。末次循环延伸68℃ 7 min)。
1.2.2 PCR扩增产物分析：参见文献［4］。
1.2.3 血浆血脂、脂蛋白、载脂蛋白测定： 总胆固醇(TC)和HDL-C用磷酸钙酸镁法，甘油三酯(TG)、LDL-C用聚乙烯硫酸法，apoB用免疫比浊法，脂蛋白［Lp(a)］用酶联免疫法。所有测定均在CL-7200型全自动生化分析仪上进行。
1.3 统计学处理 F和t检验检测各组和各基因型亚组间脂质代谢指标的差异。
2 结果
2.1 不同基因型亚组间血浆脂类水平比较 分析各组内不同基因型亚组间脂质水平差异，发现在NC组呈X-X+基因型者，TC水平明显高于呈X-X-基因型者(P＜0.001)，差异有统计学意义。ACI组及NC组其它指标在亚组间差异无显著意义。EcoRⅠ位点呈E+E-或E-E-基因型者，血浆TG水平在NC和ACI组均明显高于E+E+基因型者(P＜0.02)(附表)。
附表 ACI组和NC组不同XbaⅠ和EcoRⅠ基因型的血脂、脂蛋白、载脂蛋白水平（x±s）
|
分组 |
n |
基因型 |
TC(mmol/L) |
TG(mmol/L) |
HDL-C(mmol/L) |
LDL-C(mmol/L) |
apoA(g/L) |
apoB(g/L) |
Lp(a)(g/L) |
|
NC |
42 |
X-X- |
4.40±0.97 |
1.31±0.35 |
1.35±0.40 |
2.50±0.95 |
1.35±0.50 |
0.96±0.21 |
0.19±0.12 |
|
|
14 |
X-X+ |
5.00±1.42*** |
1.82±0.93 |
1.44±0.48 |
2.50±1.12 |
1.36±0.52 |
1.02±0.30 |
0.19±0.83 |
|
|
48 |
E+E+ |
4.60±1.11 |
1.00±0.82 |
1.34±0.42 |
2.48±0.89 |
1.30±0.44 |
0.97±0.23 |
0.20±0.13 |
|
|
8 |
E+E-或
E-E- |
4.10±1.08 |
1.51±0.67** |
1.17±0.34 |
2.22±0.81 |
1.48±0.48 |
0.94±0.21 |
0.35±0.79 |
|
ACI |
70 |
X-X- |
5.20±1.61### |
2.10±1.00 |
1.27±0.36 |
2.83±1.46 |
1.11±0.33## |
1.09±0.23## |
0.34±0.32# |
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15 |
X-X+ |
5.20±1.17 |
2.42±1.21 |
1.17±0.39 |
2.75±0.82 |
1.31±0.67 |
1.12±0.24 |
0.27±0.27 |
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75 |
E+E+ |
5.17±1.55# |
2.09±1.03### |
1.30±0.38 |
2.76±1.39 |
1.13±0.33# |
1.09±0.23### |
0.35±0.32# |
|
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10 |
E+E-或
E-E- |
5.00±1.60### |
3.86±1.89##** |
1.10±0.33 |
2.70±1.43 |
0.96±0.37### |
1.09±0.28 |
0.22±0.21 |
不同基因型相比： ***P＜0.001，**P＜0.02 ；同一基因型相比：###P＜0.001，##P＜0.01，# P＜0.05
2.2 同一基因型不同组别血脂水平比较 X-X-基因型者，ACI组患者TC、TG、apoB、Lp(a)水平均明显高于NC组，apoA明显低于NC组。呈X+X-基因型者血脂代谢水平在两组间差异不显著，而ACI组呈E+E+基因型者TC、TG、apoB、Lp(a)均明显高于NC组，apoA明显低于NC组。差异有统计学意义(附表)。
3 讨论
已知apoB基因定位于2号染色体短臂顶端P23—24区。XbaⅠ位点及EcoRⅠ位点的RFLP均由cDNA某处碱基置换而造成突变，使前者产生一个位点，后者丧失原酶切位点。
Saha报道［5］，新加坡华人apoB基因的RFLP与冠状动脉患者的血清脂质、脂蛋白和载脂蛋白的水平改变无关，但有作者认为X-X+基因型的存在与血清T-ch、LDL升高有关［6］，EcoRⅠ和MsPⅠ的RFLPs与血清T-ch、血浆TG、VLDL的变化有关［6］。本结果与后者较接近。本文报道NC组呈X-X+基因型者血浆TC升高水平明显高于呈X-X-基因型者(P＜0.001)。呈E+E-或E-E-基因型者，ACI和NC组的血浆TG水平明显高于E+E+基因型者(P＜0.02)。本资料还显示：ACI组患者中呈X-X-基因型者血浆TC、TG、apoB、Lp(a)水平升高，血浆apoA水平下降，与NC组比较差异有显著性。ACI组EcoRⅠ位点不同基因型者，TC、TG水平均高于NC组，而apoA均低于NC组，差异有显著性意义。提示：同一apoB基因基因型(X1等位基因)、EcoRⅠ位点不同基因型者，其ACI患者血脂异常较正常人突出。主要表现为高TC、TG，低apoA。由于遗传、民族、环境地区等诸多因素，国内外有关ACI与脂质代谢紊乱相关作用结果报道不一，apoB基因变异与RFLPs，与ACI患者血脂异常之间关联机理尚不明了。本研究为研究中国人ACI的发病机制提供了资料。
参考文献
1 王新德. 各类脑血管疾病诊断要点. 中华神经精神科杂志，1988，21:60
2 姚 娟，王 颍，李弘钧，等. NaⅠ裂解法抽提微量全血DNA探讨. 临床检验杂志，1997,15(6):352
3 Boerwinkle E,Lee SS, Butler R, et al. Rapid typing of aplipoprotern B DNA polymorphisms by DNA amplification Aherosclerosis, 1990, 81:225-232
4 叶 平，陈保生，王士雯. 应用聚合酶链反应，研究载脂蛋白B基因多态性及临床意义. 中华医学检验杂志，1994,12(1):7-11
5 Saha N, Tay JS, Jeyaseelan K, et al. DNA polymoprphisms of the apolipoprotein B gene in chinese coronary artery disease patients. Clin Genet, 1992, 42(4):164-170
6 Hansen TA, Nordestgaard BG, Gerdes CN, et al. Variation of apolipoprotein B gene is associated with myocardial infarction and lipoprotein levels in Danes. Athereclerosis, 1991, 89:69-81
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